中海生物教您如何倒平板/平板劃線/涂布操作流程步驟
日期:2021-11-03 | 中海生物技術(shù)文庫(kù) | 瀏覽:1866 次
前期無(wú)菌準(zhǔn)備工作:
⑴提早一個(gè)鐘頭左右時(shí)間開啟微生物實(shí)驗(yàn)室紫外燈進(jìn)行消毒滅菌處理
⑵工作人員的衣物和手,做好清潔衛(wèi)生和消毒殺菌;
⑶把用來(lái)微生物培養(yǎng)基所需容器與接種的器具和中海培養(yǎng)基等做好滅菌處理;
⑷全部的無(wú)菌操作都需在酒精燈旁進(jìn)行操作。
中海培養(yǎng)基配制:
⑴LB肉湯:肉湯粉三百三十克,葡萄糖五克,蒸餾水一千毫升;
⑵營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基:瓊脂培養(yǎng)基粉三百克,葡萄糖五克,蒸餾水一千毫升。
倒平板步驟操作流程:
⑴培養(yǎng)皿經(jīng)過(guò)滅菌處理后擺放在火苗旁的桌面上,右手拿配有中海培養(yǎng)基的錐形瓶,左手拿掉棉塞,右手拿錐形瓶,使瓶口快速進(jìn)行火苗;
⑵中海生物技術(shù)人員的左手把培養(yǎng)皿開啟一條稍超過(guò)瓶口的間隙,右手將錐形瓶中的十至二十毫升中'海培養(yǎng)基倒進(jìn)培養(yǎng)皿,左手馬上蓋好培養(yǎng)皿的皿蓋后慢慢混合均勻。
⑶大約等差不多五至十分鐘平板冷卻凝固后,把平板倒過(guò)來(lái)擺放,使皿底在上,皿蓋在下。
平板劃線流程操作:
⑴將接種環(huán)放置在火苗上灼燒,一直到接種環(huán)燒紅;
⑵在火苗旁冷卻后接種環(huán),并開啟內(nèi)盛菌液的試管的棉塞;
⑶將試管口經(jīng)過(guò)火苗。中海生物hndhjn.com培養(yǎng)基廠家
⑷將已冷卻后的接種環(huán)伸入菌液中,沾取一環(huán)菌液;
⑸將試管口經(jīng)過(guò)火苗,并塞上棉塞;
⑹左手將皿蓋開啟一個(gè)間隙,右手將沾有菌種的接種環(huán)快速滲入平板內(nèi),劃三至五條平行線,蓋緊皿蓋。要注意不能刮破培養(yǎng)基。
⑺灼燒接種環(huán)待其冷卻后,從第一區(qū)域劃線的尾端逐漸往第二區(qū)域內(nèi)劃線。多次重復(fù)上述操作流程,在三區(qū)域內(nèi)劃線。留意不能將最后一區(qū)域的劃線與第一區(qū)連在一起。
⑻將平板倒放,放進(jìn)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
進(jìn)行稀釋操作流程:
⑴將各自內(nèi)盛九毫升水的六支試管滅菌處理,并按10^6的順序編號(hào)。
⑵用移液管抽取1毫升培養(yǎng)的菌液,灌入十倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭,吹吸3次,使菌液與水完全混合均勻。
⑶從十倍稀釋的試管中抽取一毫升稀釋液,灌入一百零二倍稀釋的試管中,多次重復(fù)第2步的混合均勻進(jìn)行操作。依次類推直達(dá)成功完成最后一個(gè)試管的稀釋。注:移液管必須進(jìn)行滅菌處理。進(jìn)行操作時(shí),試管口和移液管應(yīng)在離火苗的一至二厘米處。
涂布平板操作流程:
⑴將涂布器浸在內(nèi)盛酒精的燒杯中;
⑵取不超過(guò)0.1毫升少許菌液,滴加到中.海培養(yǎng)基外表面;
⑶將沾有少許酒精的涂布器在火苗上點(diǎn)燃,待酒精燒盡后,冷卻后八至十秒;
⑷用涂布器將菌液均衡地涂布在培養(yǎng)基外表。涂布時(shí)可旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿,使涂布均衡。
需要注意事項(xiàng):
⑴將涂布器尾端浸在內(nèi)盛70%濃度酒精的燒杯中。取出來(lái)時(shí)要讓多出的酒精在燒杯中滴盡,接著將沾有少許酒精的涂布器在火苗上燃燒。
⑵操作流程中一定要留意防火安全!不能將溫度過(guò)高的涂布器放置在存放酒精的燒杯中,防止燃燒其中的酒精。
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