中海生物技術(shù)棗莊公司總結(jié)計算微生物數(shù)量zhzbio.com微生物數(shù)量測定使用的十三種方法。

方法一：血球計數(shù)：

血球計數(shù)是具有特殊的結(jié)構(gòu)尺度和厚度玻璃片。玻璃上有四個凹槽和兩個脊，中間有一個短橫凹槽和兩個平臺，兩個脊的表面比兩個平臺的表面高0.1毫米。每個平臺都刻有不同規(guī)格的格子，在中心0.1平方毫米的面積上刻有400個小方塊。用油鏡觀察，統(tǒng)計某個大格子內(nèi)微生物的數(shù)量，可以計算出1ml菌液的含量，血球計數(shù)方法簡單、直觀、快捷，但只適用于對產(chǎn)生的孢子進行計數(shù)由單細胞微生物或絲狀微生物組成，結(jié)果是包括死細胞在內(nèi)的細菌總數(shù)。

方法二：染色計數(shù)：

為了彌補有些微生物在油鏡下不易查看計數(shù)，直接用血球計數(shù)法無法區(qū)分死細胞和活細胞的缺點，進而發(fā)明了染色計數(shù)法。在不同染料的幫助下，細菌可以被正確染色。中海認為這樣在顯微鏡下活菌計數(shù)更為方便。

方法三：比例計數(shù)：

將霉??菌孢子或紅細胞等已知顆粒濃度的液體和待測細胞濃度的菌液按適量比例融合，靠顯微鏡觀察并計算相應(yīng)菌數(shù)，以獲得未知菌液的細胞濃度。中海生物此法使用比較廣泛，需要以已知顆粒濃度配制懸浮液為標準。

方法四：液體稀釋：

對未知細菌樣品進行連續(xù)10倍稀釋。根據(jù)估計的數(shù)量，從最合適的三個連續(xù)10倍稀釋液中，每個樣品取5ml，接種1ml至3組含有培養(yǎng)液的十五個試管中。培養(yǎng)后記錄每個稀釋度已經(jīng)生長的試管數(shù)，然后查看最大概率表MPN得到細菌樣本的細菌數(shù)，并根據(jù)樣本稀釋度計算活菌含量多少？液體稀釋計數(shù)方法常用于食品中微生物限度檢測。

方法五：平板菌落計數(shù)：

這是最常用的活菌計數(shù)方法。將待測菌液進行梯度稀釋，取適當(dāng)數(shù)量的稀釋菌液與相匹配的固體培養(yǎng)基混合均勻后凝固，在凝固后的固體培養(yǎng)基板上涂上菌液。保溫培養(yǎng)后，將平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)乘以菌液的稀釋度，計算出原菌液中的菌數(shù)。通常在九厘米直徑的平板上有50~500個菌落比較合適，平板菌落計數(shù)方法較為繁瑣，要求操作者技術(shù)非常熟練。平板菌落計數(shù)法不僅能獲得菌液中的活菌數(shù)，還可以將菌液中的細菌分離再培養(yǎng)一次獲得單克隆。 

方法六：試劑紙計數(shù)：

在平板計數(shù)法的基礎(chǔ)上，開發(fā)了可以快速計數(shù)的小厚濾紙片、瓊脂片等小商品。在濾紙和瓊脂片中吸出合適的培養(yǎng)基，加入活性指示劑2,3,5-三苯基氯化四唑TTC，將待測菌液浸入無色培養(yǎng)后放入密封包裝袋中。短期培養(yǎng)后，濾紙上出現(xiàn)一定密度的玫瑰色微菌落，與標準紙色板的光譜比較，中.海以估計樣品的細菌含量。試劑紙計數(shù)法快速準確，相比平板計數(shù)法，減少人為操作失誤。

方法七：膜過濾計數(shù)：

用特制的濾膜過濾一些含菌樣品，用AO(丫叮橙)染色，用紫外顯微鏡下查看細胞熒光顏色，死細胞會發(fā)出綠色熒光，活細胞會發(fā)出橙色熒光。

方法八：生理指標法：

微生物的成長伴隨著酸堿度，發(fā)酵液中的含氮量/含糖量/產(chǎn)氣量等生理指標的變化，有許多生產(chǎn)量相向的生理指標，是作為生長測定的相對值。

方法九：含氮量測定：

大部分細菌的含氮量為干重的12.5，酵母為7.5，霉菌為6.0。依據(jù)含氮量×6.25可確定粗蛋白含量。測定含氮量的方法很多，如用硫酸/過氯酸/碘酸/磷酸等消化法和杜馬斯氮氣法。 杜馬斯法測 N? 氣體法是將樣品與 CuO 混合，在二氧化碳氣流中加熱產(chǎn)生氮氣，收集在呼吸計中，用 KOH 吸收 CO2N? 的量進行測量。

方法十：碳含量測定：

將部分干重0.2~2.0毫克的生物材料混入1毫升水或無機緩沖液，用2毫升重鉻酸鉀的2%溶液100℃溫度沸水加熱三十分鐘后冷卻。用水稀釋至5ml，在580納米波長讀取生長量可以通過吸光度值計算。需要試劑做空白對照，標準樣品做標準曲線。

方法十一：測定氨基氮：

將發(fā)酵液離心，取上清液，加甲基紅和鹽酸為指示劑，加0.02N 氫氧化鈉顯色至顏色剛好褪去，加入基材18%的中性甲醛，反應(yīng)一段時間，加入0.02N變色，氨基氮含量根據(jù)氫氧化鈉用量換算。根據(jù)培養(yǎng)液中氨基氮的含量，可以間接反映微生物的生長狀況。

方法十二：測定還原糖：

還原糖通常是指單糖、寡糖，能直接被微生物使用。還原糖的測定可以間接反映微生物的生長狀況。經(jīng)常應(yīng)用大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)中'海微生物生長的常規(guī)監(jiān)測。測定還原糖方法是將發(fā)酵液離心。取上清液加斐林試劑，沸水煮三分鐘，然后取出加少許鹽酸酸化，接近終點時加入硫代硫酸鈉，加入淀粉溶液，繼續(xù)加硫代硫酸鈉到終點，查表讀取還原糖含量。

方法十三：測定其他生理物質(zhì)：

P/DNA/RNA/ATP/NAM乙酰胞壁酸等指標，中 海以標記葡萄糖為底物的產(chǎn)酸/產(chǎn)氣/CO2產(chǎn)量/耗氧量/粘度/產(chǎn)熱等指標可用于生長的測定.也可以根據(jù)反應(yīng)前后底物濃度的變化、最終產(chǎn)氣量和微生物活性的變化來反映微生物的生長情況。

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