禽流感（H9 亞型）血凝抑制試驗抗原使用說明書
日期：2023-12-06 | 中海生物技術(shù)文庫 | 瀏覽：643 次
【獸藥名稱】
通用名稱：禽流感（H9 亞型）血凝抑制試驗抗原
商品名稱：無
英文名稱：Avian Influenza Virus(H9 subtype) Antigen for
Blood Hemagglutination Inhibition Test
漢 語 拼 音 ： Qiuliugan(H9 yaxing)Xueningyizhishiyan
Kangyuan
【主要成分與含量】本抗原為滅活的禽流感（H9 亞型）病毒，
血凝效價≧1:128（即 2
7
）
【性狀】為疏松團(tuán)塊。
【作用與用途】適用于血凝抑制試驗檢測禽流感（H9 亞型）病
毒抗體
【用法與判定】
1 材料
移液器及吸頭、1/15mol/L PBS（pH 值 7.0-7.2）、96 孔微量血
凝板（V 型）、1%（V/V）雞紅細(xì)胞懸液、加樣槽等。
2 試驗操作
2.1 血凝試驗（HA）
2.1.1 96 孔微量血凝板 1-12 孔加入 PBS0.025ml，取抗原 0.025ml
加入第 1 孔中，反復(fù)稀釋 5～10 次混勻，從第 1 孔中取 0.025ml 加入第 2 孔，稀釋混勻取 0.025ml 加入第 3 孔，依此倍比稀釋至第 11 孔，
第 12 孔作為紅細(xì)胞對照孔。每孔補(bǔ)加 PBS0.025ml，再加入 1%（V/V）
雞紅細(xì)胞懸液 0.025ml，血凝板震蕩混勻，室溫放置 15～40 分鐘或
置 2～8℃40～60 分鐘。
2.1.2 結(jié)果判定 將血凝板傾斜 60 度，當(dāng)對照孔中的紅細(xì)胞呈顯
著流淌的淚滴狀時判讀結(jié)果。以使紅細(xì)胞完全凝集的最高稀釋度作為
血凝價。
2.2 血凝抑制試驗（HI）
2.2.1 依據(jù)抗原 HA 血凝效價，配制 4 個血凝單位抗原（4HAU）。
舉例:血凝效價為 1:128，即 128/4=32（即稀釋倍數(shù)為 1:32）。取 PBS
9ml,加入抗原 1.0ml,（即成 1:10 稀釋）震蕩混勻取 1.0ml，加入
2.2mlPBS 中，使最終濃度為 1:32。對其血凝價進(jìn)行回歸檢驗校準(zhǔn)后，
2～8℃存放待用。
2.2.2 96 孔微量血凝板 1-11 孔加入 PBS0.025ml，第 12 孔加入
PBS0.05ml，取待檢血清 0.025ml 加入第 1 孔中，反復(fù)稀釋 5～10 次
混勻，從第 1 孔中取 0.025ml 加入第 2 孔，稀釋混勻取 0.025ml 加入
第3孔，依此倍比稀釋至第10孔。取4HAU于1-11孔每孔加入0.025ml，
血凝板震蕩混勻，37℃作用 20 分鐘。再每孔加入 1%（V/V）雞紅細(xì)
胞懸液 0.025ml。第 11 孔為 4HAU 對照孔，第 12 孔為紅細(xì)胞對照孔。
將血凝板震蕩混勻，室溫放置 15～40 分鐘。
2.2.3 結(jié)果判定 將血凝板傾斜 60 度，若 4HAU 對照孔無紅細(xì)胞
凝集，紅細(xì)胞對照孔有紅細(xì)胞凝集，且呈明顯流淌的淚滴狀時，試驗成立，可判讀結(jié)果。使紅細(xì)胞凝集被完全抑制的血清最高稀釋度判為
被檢血清 HI 效價。
【注意事項】
1．倍比稀釋時，吸液、吐液動作不應(yīng)過快，防止污染其他孔及
取量不準(zhǔn)確。
2．4HAU 應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，使用時充分混勻。
3．使用 1%雞紅細(xì)胞懸液時，應(yīng)輕搖混勻。
4．因環(huán)境溫度不同，判定結(jié)果時，可依據(jù)對照孔情況，適當(dāng)調(diào)
整作用時間。
5．設(shè)立陰、陽性血清對照，且當(dāng)陰性對照血清 HI 效價≦1:4、
陽性對照血清 HI 效價與已知結(jié)果相比，誤差≤1 個稀釋度時，試驗
方可成立。
6.抗原使用前需用無菌生理鹽水復(fù)溶。
【規(guī)格】 2ml/瓶
【貯藏與有效期】 -15℃以下保存，有效期為 12 個月
【包裝】 10 瓶/盒
僅供獸醫(yī)診斷使用
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