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    配制培養(yǎng)基時(shí)的注意事項(xiàng)以及常見問題分析

    日期:2023-10-25 | 中海生物技術(shù)文庫(kù) | 瀏覽:683 次

    一、配制培養(yǎng)基時(shí)的注意事項(xiàng)

     

    01

    培養(yǎng)基在滅菌前,需進(jìn)行加熱溶解(含瓊脂的培養(yǎng)基需煮沸4-6次至瓊脂完全溶解),再進(jìn)行分裝滅菌(應(yīng)不超過(guò)1000mL);

    02

    含瓊脂培養(yǎng)基,若滅菌前未進(jìn)行加熱溶解,滅菌后需充分搖勻使用;

    03

    所有培養(yǎng)基不宜滅菌過(guò)度和長(zhǎng)時(shí)間保溫,特別是含糖量高的培養(yǎng)基,如沙氏葡萄糖瓊脂,滅菌過(guò)度或保溫時(shí)間過(guò)長(zhǎng)易使葡萄糖發(fā)生焦化,滅菌后的培養(yǎng)基顏色會(huì)變深,pH會(huì)下降,此外還會(huì)使蛋白胨中的維生素分解,降低培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng);

    04

    需另加添加劑的培養(yǎng)基通常在培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)加入,已加入添加劑的瓊脂類培養(yǎng)基不可熔化再次使用;

    05

    配制好的培養(yǎng)基需及時(shí)滅菌,不可久置;

    06

    培養(yǎng)基不可重復(fù)滅菌;

    07

    瓊脂培養(yǎng)基不可反復(fù)熔化使用;待用的瓊脂培養(yǎng)基可置47-50℃水浴保溫或50-60℃烘箱保溫,一般不可超過(guò)4小時(shí);

    08

    使用蒸餾水或純化水配制。飲用水或自來(lái)水中由于含礦物鹽離子,配制培養(yǎng)基會(huì)產(chǎn)生渾濁現(xiàn)象;

    09

    容器不易過(guò)滿,容量至少應(yīng)比培養(yǎng)基體積大20%。

     

    二、配制過(guò)程中的常見問題分析

     

    01
    培養(yǎng)基顏色不正確

    (1)含有酸堿指示劑的培養(yǎng)基,若顏色不正確,通常是由于pH不正確導(dǎo)致的,加熱過(guò)度、錯(cuò)誤的滅菌方式等都會(huì)導(dǎo)致此項(xiàng)問題。

    (2)加熱過(guò)度導(dǎo)致某些成分分解或糖焦化,如SC培養(yǎng)基加熱過(guò)度會(huì)變紅,含糖量高的培養(yǎng)基,加熱過(guò)度通常會(huì)出現(xiàn)顏色加深,呈焦糖色或棕褐色。

    (3)某些成分變質(zhì),如血液久置易變黑,制成的平板顏色偏棕黑色。

     

    02
    培養(yǎng)基不凝固或凝固性差

    (1)稱量錯(cuò)誤

    (2)瓊脂分布不均勻

    (3)培養(yǎng)基pH不正確

    (4)加熱過(guò)度

    (5)瓊脂量不足

    滅菌前未加熱溶解,滅菌后未充分搖勻,

    會(huì)出現(xiàn)分層現(xiàn)象,瓊脂凝固在底層,上層不凝固

    03
    培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀

    (1)某些培養(yǎng)基原本就含有不溶性沉淀,如TTB,MC培養(yǎng)基等,配方中含有大量不溶性碳酸鈣。

    (2)滅菌前未充分溶解,如Fraser培養(yǎng)基中含有大量磷酸鹽,若滅菌前溶解不充足,滅菌后就會(huì)出現(xiàn)大量沉淀。

    (3)pH不正確,偏酸或偏堿都有可能使培養(yǎng)基中的部分金屬離子產(chǎn)生沉淀。

    (4)水的純度不夠,天然水中含有較多的礦物鹽離子,若未除凈,則易與培養(yǎng)基中的磷酸鹽反應(yīng)生成沉淀。

    (5)添加劑加入溫度不正確,卵黃、血液等對(duì)溫度敏感的添加成分,若加入時(shí)溫度過(guò)高或溫差過(guò)大,易出現(xiàn)凝塊。

    (6)稱量錯(cuò)誤。

    (7)試劑加入順序不正確。

    04
    培養(yǎng)基污染

    (1)滅菌方式不正確,導(dǎo)致滅菌不徹底

    (2)滅菌鍋的滅菌效力不達(dá)標(biāo)

    (3)滅菌量過(guò)多,滅菌前未加熱溶解

    (4)培養(yǎng)基本身含耐熱菌較多

    (5)滅菌過(guò)程中,滅菌鍋內(nèi)冷空氣未排干凈

    (6)滅菌鍋放置過(guò)滿

    (7)操作過(guò)程發(fā)生污染

    (8)分裝培養(yǎng)基器皿滅菌不充分

    (9)濾膜破損


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