關(guān)于培養(yǎng)基制備與使用常見六個問題解答
日期:2021-09-01 | 中海生物技術(shù)文庫 | 瀏覽:1052 次
中海生物技術(shù)關(guān)于培養(yǎng)基制備zhzbio.com培養(yǎng)基使用的常見六個問題做以下解答,希望會對大家有所幫助。
問題一:低血清培養(yǎng)基的pH值可以用肉眼判斷嗎?
解答:低血清培養(yǎng)基中 海酚紅的含量與正常培養(yǎng)基中酚紅的含量不同。pH 值無法通過目測或經(jīng)驗確定。倡導(dǎo)采取專用pH計進行檢測判定。
問題二:低血清培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)是什么?
解答:平衡鹽一般由無機鹽和葡萄糖組成。平衡鹽包括有Earles系統(tǒng)/Hanks系統(tǒng)/Dulbeccos磷酸緩沖鹽系統(tǒng)等。MEM系列培養(yǎng)基和199系列培養(yǎng)基均有Hanks系統(tǒng)的培養(yǎng)基及Earles系統(tǒng)的培養(yǎng)基。然而部分培養(yǎng)基采用的不是上述常規(guī)平衡鹽系統(tǒng),舉例RPMI 1640培養(yǎng)基和F12培養(yǎng)基。MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基也不是常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng),其平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力強于常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)。
問題三:谷氨酰胺溶液和碳酸氫鈉的制備方法是什么?
解答:以制備0.2摩爾/升的L-谷氨酰胺為例:稱取2.92克L-谷氨酰胺,加100毫升注射用水,完全攪拌均勻。使用0.2μm濾膜過濾除菌。溶液需在 4°C 下儲存并避光,并在14天內(nèi)使用。以制備7.5%碳酸氫鈉為例:稱取7.5克碳酸氫鈉溶解于100毫升蒸餾水中除菌過濾。
問題四:什么樣的培養(yǎng)基可以不加酚紅?
解答:酚紅在培養(yǎng)基中主要用作pH指示劑:酸性時為黃色,堿性時呈紫色,呈中性時為紅色。酚紅本身不影響中海生物制品質(zhì)量,能夠通過純化技術(shù)去除。然而無血清培養(yǎng)基中的酚紅可能會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈉、鉀失衡并影響細(xì)胞孕育。這種效果必然可以被血清吸收和或減輕。酚紅不是中.海培養(yǎng)基中需求的重要成分。國外許多疫苗或抗體制造商在制作生產(chǎn)過程中使用無酚紅培養(yǎng)基。
問題五:為什么放入冰箱的培養(yǎng)基顏色會發(fā)生改變?
解答: 培養(yǎng)基儲藏在4°C的冰箱中。培養(yǎng)基中的二氧化碳會逐漸釋放,使培養(yǎng)基堿性越大。通常培養(yǎng)基中海的酸堿指示劑是酚紅,隨著堿度的增加,顏色也隨之變深變紅。倘若培養(yǎng)基堿性太強又用在細(xì)胞培養(yǎng)上,勢必會導(dǎo)致細(xì)胞生長停滯與死亡。當(dāng)培養(yǎng)基堿性太強狀態(tài)需要通過無菌過濾的二氧化碳來調(diào)節(jié)pH值。
問題六:有血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基的抗生素用量相同嗎?
解答:在無血清培養(yǎng)環(huán)境情況,抗生素是不會被滅活。中'海無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時,至少降低血清中使用的濃度50%。由于血清中的蛋白質(zhì)相互結(jié)合并滅活部分抗生素。
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