一、菌種斜面低溫保藏儲(chǔ)存方法  

 1、將細(xì)菌接種在合適的固態(tài)斜面培養(yǎng)基上。細(xì)菌充分生長(zhǎng)后，用油紙包裹棉塞，將其移至二至八攝氏度的冰箱中進(jìn)行保存。  

 2、中海微生物霉菌，放線(xiàn)菌和帶有孢子的細(xì)菌要保存二到四個(gè)月，然后移植一次。 酵母菌有兩個(gè)月大，最好每個(gè)月移植一次細(xì)菌。  

此方法是實(shí)驗(yàn)室和工廠菌株房中常用的保存方法。它具有操作簡(jiǎn)單，使用方便，不需要專(zhuān)用設(shè)備的優(yōu)點(diǎn)，中'海并且可以隨時(shí)檢查保存的菌株是否死亡，變異和污染。缺點(diǎn)是易于突變，因?yàn)榕囵B(yǎng)基物理和化學(xué)性質(zhì)不是嚴(yán)格恒定的。重復(fù)傳代會(huì)改變微生物的新陳代謝，從而影響微生物的特性；有更多機(jī)會(huì)污染細(xì)菌。

二、菌種濾紙保藏儲(chǔ)存方法

 1、將濾紙裁切成0.5*1.2厘米規(guī)格的小條，放入一兩張0.6*8厘米的安瓿管中，塞滿(mǎn)1.05kg / cm2的棉塞，在121.3°C下滅菌三十分鐘。  

 2、培養(yǎng)需要保存在合適的傾斜培養(yǎng)基上以使其完全生長(zhǎng)的菌株。   

 3、取1-2ml無(wú)菌脫脂牛奶并將其放入無(wú)菌陪替氏培養(yǎng)皿或試管中，然后將其與牛奶混合制成濃縮懸浮液。

 4、使用無(wú)菌鑷子從安瓿管中取出濾紙條，并將其浸入細(xì)菌懸浮液中使其充滿(mǎn)，然后將其放回安瓿管中，并在其上放一個(gè)棉塞。  

 5、將安瓿瓶管放入含有五氧化二磷作為吸水劑的干燥器中，并使用真空泵將其抽干。  

 6、將棉布放入試管中并用火焰密封，中海生物技術(shù)（zhzbio.com）

 7、需要使用菌株。恢復(fù)培養(yǎng)時(shí)，在火焰上加熱安瓿的嘴，在被加熱的部分上滴一滴冷水以打破玻璃杯，然后用鑷子敲打玻璃杯。打開(kāi)安瓿瓶后，將其取出。 

將濾紙放入中海液體培養(yǎng)基中，然后在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)菌，酵母和絲狀真菌可以通過(guò)這種方式保存。前兩個(gè)可以保存大約兩年，有些絲狀真菌甚至可以保存十四至十七年。此方法比液氮和冷凍干燥方法簡(jiǎn)單，不需要特殊設(shè)備。

三、菌種液體石蠟保藏儲(chǔ)存方法  

 1、將液體石蠟分配到錐形瓶中，用棉塞塞好并用牛皮紙包裹，然后用1.05kg / cm2，在121.3°C消毒加熱30分鐘，然后將其置于40°C的培養(yǎng)箱中以蒸發(fā)水蒸氣，然后放置。 

 2、在最合適的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)需要保存的細(xì)菌。  

 3、使用無(wú)菌吸管吸取無(wú)菌液體石蠟，然后將其注入細(xì)菌生長(zhǎng)的斜坡。該量應(yīng)在斜坡頂部上方1厘米處，以使細(xì)菌與空氣隔離。  

 4、垂直放置試管，并將其存放在低溫或室溫下。在室溫下儲(chǔ)存的微生物壽命將比在冰箱中更長(zhǎng)。  

此方法實(shí)用有效。霉菌，放線(xiàn)菌和孢子細(xì)菌可以保存兩年以上而不會(huì)死亡，酵母可以保存1-2年，一般非孢子細(xì)菌也可以保存壹年左右，即使是腦膜炎球菌也很難按常規(guī)方法保存，在37℃下也可以在培養(yǎng)箱中保存三個(gè)月。 

此方法的優(yōu)點(diǎn)是生產(chǎn)簡(jiǎn)單，無(wú)需專(zhuān)用設(shè)備且無(wú)需頻繁移植。缺點(diǎn)是在存儲(chǔ)過(guò)程中必須將其垂直放置，這會(huì)占用很大的空間并且不便于攜帶。從液體石蠟下面取下培養(yǎng)物并移植后，當(dāng)接種環(huán)在火焰上燃燒時(shí)，中.海培養(yǎng)物很可能會(huì)與剩余的液體石蠟飛濺，因此應(yīng)特別注意。 

四、菌種沙土保藏儲(chǔ)存方法  

 1、取河砂，加入10稀鹽酸，加熱煮沸30分鐘以除去有機(jī)物。  

 2、倒出酸性水，用自來(lái)水沖洗至中性。  

 3、干燥并用40目篩子過(guò)篩，以除去粗顆粒并放在一旁。  

 4、從非耕作層中取出不含腐殖質(zhì)的瘦黃土或紅色土壤，用自來(lái)水浸泡并清洗幾次，直到呈中性。  

 5、干燥粉碎后通過(guò)100目篩子進(jìn)行篩分，以除去粗糙的顆粒。  

 6、根據(jù)黃土的比例與砂子的比例為三分之三或根據(jù)需要以其他比例混合，甚至可以將所有沙子或所有土壤均勻混合，放入10×100毫米的小試管或安瓿瓶試管中，每支試管中約裝1g，放在棉塞上，消毒并干燥。   

 7、取樣進(jìn)行無(wú)菌檢查，每十根沙土管抽一次，將沙土倒入中海肉湯培養(yǎng)基，并在37°C孵育四十八小時(shí)。如果仍然存在細(xì)菌，則都需要重新消毒，然后可以使用無(wú)菌測(cè)試，它可以被使用直到被證明是無(wú)菌的。  

 8、成熟孢子層的選擇通常是指孢子層的完全生長(zhǎng)，而營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞對(duì)該方法無(wú)效。好的菌株用無(wú)菌水洗滌以制備孢子懸浮液。  

 9、向每個(gè)沙質(zhì)土壤管中加入約0.5ml孢子懸浮液，通常只是為了潤(rùn)濕沙質(zhì)土壤。 

 10、將其放在真空干燥器中，并使用真空泵排水。排水時(shí)間越短越好。確保在12小時(shí)內(nèi)將其排干。  

 11、從10中取出一個(gè)，使用接種環(huán)取出一些沙粒，將其接種在傾斜的培養(yǎng)基上，然后培育成觀察生長(zhǎng)情況以及是否有細(xì)菌生長(zhǎng)。如果細(xì)菌存在或菌落數(shù)量很少或根本不長(zhǎng)，則表明生產(chǎn)的沙子和土壤管道存在問(wèn)題，需要進(jìn)一步抽樣檢查。  

 12、如果檢查后沒(méi)有問(wèn)題，請(qǐng)用火焰密封噴嘴并將其存放在冰箱或室內(nèi)干燥的地方。 每六個(gè)月檢查一次活力和細(xì)菌狀況。  

 13、需要使用細(xì)菌?；謴?fù)培養(yǎng)物時(shí)，取少許沙子，將其轉(zhuǎn)移到中 海液體培養(yǎng)基中，然后放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。  

此方法主要用于可產(chǎn)生孢子的微生物，例如霉菌和放線(xiàn)菌。因此，它是工業(yè)生產(chǎn)中使用最廣泛的抗生素，效果良好。它可以保存大約兩年，但是將其應(yīng)用于植物細(xì)胞時(shí)無(wú)效。 

五、菌種冷凍干燥保藏儲(chǔ)存方法  

 1、準(zhǔn)備安瓿瓶試管。用于冷凍干燥細(xì)菌保存的安瓿管應(yīng)由中性玻璃制成。形狀可以是長(zhǎng)頸和球形底部，也稱(chēng)為淚滴型安瓿管。該尺寸需要6-7.5mm的外徑，105mm的長(zhǎng)度和球形部分。直徑為9-11mm，壁厚為0.6-1.2mm。 也可以使用不帶球形部件的管狀安瓿瓶管。放入1.05kg / cm2的棉塞，在121.3°C下滅菌30分鐘，然后放置。 

 2、準(zhǔn)備菌株并冷凍干燥保存的菌株菌株，保存期可以達(dá)到幾年到十年以上。為了避免多年后出現(xiàn)錯(cuò)誤，應(yīng)特別注意所用菌株的純度，即應(yīng)沒(méi)有雜菌。污染，然后在最佳溫度下的中海培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，從而可以培養(yǎng)出良好的培養(yǎng)物。 

細(xì)菌和酵母菌的年齡要求超過(guò)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。如果使用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)菌進(jìn)行保存，則它們的存活率將會(huì)降低。通常，細(xì)菌需要24-48小時(shí)的培養(yǎng)；酵母需要培養(yǎng)3天；應(yīng)當(dāng)將形成孢子的微生物保存為孢子；將放線(xiàn)菌和絲狀真菌培養(yǎng)7-10天。

 3、細(xì)菌懸液的制備和分配以細(xì)菌坡度為例，在傾斜管中加入約2ml脫脂牛奶制成濃縮細(xì)菌溶液，并向每個(gè)安瓿管中分配0.2ml。

 4、凍干機(jī)作為成套設(shè)備出售，價(jià)格昂貴。這里是可以達(dá)到相同目的的簡(jiǎn)單方法和設(shè)備。將等分的安瓿瓶管放入低溫冰箱中并冷凍。沒(méi)有冷凍劑，如干冰固態(tài)CO2醇液或干冰丙酮液，溫度可達(dá)-70℃。將安瓿瓶管插入制冷劑中，冷凍4-5分鐘以?xún)鼋Y(jié)懸浮液。 

 5、真空干燥是在真空干燥過(guò)程中保持樣品冷凍。有必要準(zhǔn)備一個(gè)冷凍罐，在其中放置碎碎的冰塊和鹽，混合均勻，并可以冷卻到-15°C。通常，如果真空在30分鐘內(nèi)可以達(dá)到93.3Pa0.7mmHg，則干燥的物料將不會(huì)融化，然后繼續(xù)泵送空氣。在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)，肉眼可以看到干燥的材料已經(jīng)變干，通常將真空泵抽至真空水平 26.7Pa0.2mmHg，保持壓力6-8小時(shí)。  

 6、抽真空密封并干燥后，取出安瓿瓶管并將其連接到用于密封的玻璃管。使用L形五通管繼續(xù)抽氣，它將在大約十分鐘內(nèi)達(dá)到26.7Pa0.2mmHg。在真空狀態(tài)下，安瓿的頸部被薄薄的噴槍火焰密封。 密封后，在室溫下存放在冰箱或黑暗的地方。

六、菌種液氮冷凍保藏儲(chǔ)存方法  

 1、準(zhǔn)備用于保存液氮的安瓿瓶試管。安瓿瓶管必須能夠承受溫度的突然變化而不會(huì)破裂。需使用硼硅酸鹽玻璃制造工藝生產(chǎn)的安瓿瓶，安瓿瓶的尺寸通常為75×10毫米，或者可以容納1.2毫米液體的安瓿瓶。  

 2、在添加保護(hù)劑并進(jìn)行滅菌以存儲(chǔ)細(xì)菌時(shí)，酵母或霉菌孢子和其他易于分散的細(xì)胞，用1.05kg / cm2的棉塞塞住空的安瓿瓶管，并在121.3°C滅菌15分鐘：如果用于保存霉菌菌絲，需要在安瓿瓶管中加入保護(hù)劑，例如10蒸餾甘油或10％二甲基亞砜蒸餾水。添加量限于以后可以添加的菌落圓，然后在1.05kg / cm2和121.3℃滅菌十五分鐘。 

 3、用10％甘油蒸餾水溶液制成菌株，放入無(wú)菌安瓿瓶中。對(duì)于霉菌菌絲，使用無(wú)菌沖頭從平板上切下菌落。將其放入裝有保護(hù)劑的安瓿瓶中，然后用火焰密封。浸入水中以檢查是否泄漏。 

 4、然后將密封的安瓿瓶試管以每分鐘下降1°C的慢速冷凍至-30°C。 如果將細(xì)胞劇烈冷凍，則細(xì)胞內(nèi)部會(huì)形成冰晶，從而降低存活率。 

 5、保存后，將安瓿瓶冷凍至-30°立即將C放入液氮冷凍機(jī)的小圓筒中，然后將小圓筒放入液氮保存器中。液氮存儲(chǔ)中的氣相溫度為-150°C，液氮為-196°C。 

 6、需要恢復(fù)培養(yǎng)液時(shí)并保存菌株，取出安瓿瓶管，立即將其置于38-40°C的水浴中以快速融化，直到所有融化。然后打開(kāi)安瓿瓶管，將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到合適的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。  

此方法不僅適用于一般微生物的保存，還適用于某些難處理的中海微生物的保存。通過(guò)諸如支原體，衣原體，氫細(xì)菌等冷凍干燥方法進(jìn)行保存，可以將難以形成孢子的霉菌，噬菌體和動(dòng)物細(xì)胞保存很長(zhǎng)時(shí)間，而不會(huì)改變其性質(zhì)。缺點(diǎn)是需要特殊設(shè)備。  

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