中海生物技術(shù)棗莊公司總結(jié)計(jì)算微生物數(shù)量zhzbio.com微生物數(shù)量測(cè)定使用的十三種方法。

方法一：血球計(jì)數(shù)：

血球計(jì)數(shù)是具有特殊的結(jié)構(gòu)尺度和厚度玻璃片。玻璃上有四個(gè)凹槽和兩個(gè)脊，中間有一個(gè)短橫凹槽和兩個(gè)平臺(tái)，兩個(gè)脊的表面比兩個(gè)平臺(tái)的表面高0.1毫米。每個(gè)平臺(tái)都刻有不同規(guī)格的格子，在中心0.1平方毫米的面積上刻有400個(gè)小方塊。用油鏡觀察，統(tǒng)計(jì)某個(gè)大格子內(nèi)微生物的數(shù)量，可以計(jì)算出1ml菌液的含量，血球計(jì)數(shù)方法簡(jiǎn)單、直觀、快捷，但只適用于對(duì)產(chǎn)生的孢子進(jìn)行計(jì)數(shù)由單細(xì)胞微生物或絲狀微生物組成，結(jié)果是包括死細(xì)胞在內(nèi)的細(xì)菌總數(shù)。

方法二：染色計(jì)數(shù)：

為了彌補(bǔ)有些微生物在油鏡下不易查看計(jì)數(shù)，直接用血球計(jì)數(shù)法無法區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞的缺點(diǎn)，進(jìn)而發(fā)明了染色計(jì)數(shù)法。在不同染料的幫助下，細(xì)菌可以被正確染色。中海認(rèn)為這樣在顯微鏡下活菌計(jì)數(shù)更為方便。

方法三：比例計(jì)數(shù)：

將霉菌孢子或紅細(xì)胞等已知顆粒濃度的液體和待測(cè)細(xì)胞濃度的菌液按適量比例融合，靠顯微鏡觀察并計(jì)算相應(yīng)菌數(shù)，以獲得未知菌液的細(xì)胞濃度。中海生物此法使用比較廣泛，需要以已知顆粒濃度配制懸浮液為標(biāo)準(zhǔn)。

方法四：液體稀釋：

對(duì)未知細(xì)菌樣品進(jìn)行連續(xù)10倍稀釋。根據(jù)估計(jì)的數(shù)量，從最合適的三個(gè)連續(xù)10倍稀釋液中，每個(gè)樣品取5ml，接種1ml至3組含有培養(yǎng)液的十五個(gè)試管中。培養(yǎng)后記錄每個(gè)稀釋度已經(jīng)生長(zhǎng)的試管數(shù)，然后查看最大概率表MPN得到細(xì)菌樣本的細(xì)菌數(shù)，并根據(jù)樣本稀釋度計(jì)算活菌含量多少？液體稀釋計(jì)數(shù)方法常用于食品中微生物限度檢測(cè)。

方法五：平板菌落計(jì)數(shù)：

這是最常用的活菌計(jì)數(shù)方法。將待測(cè)菌液進(jìn)行梯度稀釋，取適當(dāng)數(shù)量的稀釋菌液與相匹配的固體培養(yǎng)基混合均勻后凝固，在凝固后的固體培養(yǎng)基板上涂上菌液。保溫培養(yǎng)后，將平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)乘以菌液的稀釋度，計(jì)算出原菌液中的菌數(shù)。通常在九厘米直徑的平板上有50~500個(gè)菌落比較合適，平板菌落計(jì)數(shù)方法較為繁瑣，要求操作者技術(shù)非常熟練。平板菌落計(jì)數(shù)法不僅能獲得菌液中的活菌數(shù)，還可以將菌液中的細(xì)菌分離再培養(yǎng)一次獲得單克隆。

方法六：試劑紙計(jì)數(shù)：

在平板計(jì)數(shù)法的基礎(chǔ)上，開發(fā)了可以快速計(jì)數(shù)的小厚濾紙片、瓊脂片等小商品。在濾紙和瓊脂片中吸出合適的培養(yǎng)基，加入活性指示劑2,3,5-三苯基氯化四唑TTC，將待測(cè)菌液浸入無色培養(yǎng)后放入密封包裝袋中。短期培養(yǎng)后，濾紙上出現(xiàn)一定密度的玫瑰色微菌落，與標(biāo)準(zhǔn)紙色板的光譜比較，中.海以估計(jì)樣品的細(xì)菌含量。試劑紙計(jì)數(shù)法快速準(zhǔn)確，相比平板計(jì)數(shù)法，減少人為操作失誤。

方法七：膜過濾計(jì)數(shù)：

用特制的濾膜過濾一些含菌樣品，用AO(丫叮橙)染色，用紫外顯微鏡下查看細(xì)胞熒光顏色，死細(xì)胞會(huì)發(fā)出綠色熒光，活細(xì)胞會(huì)發(fā)出橙色熒光。

方法八：生理指標(biāo)法：

微生物的成長(zhǎng)伴隨著酸堿度，發(fā)酵液中的含氮量/含糖量/產(chǎn)氣量等生理指標(biāo)的變化，有許多生產(chǎn)量相向的生理指標(biāo)，是作為生長(zhǎng)測(cè)定的相對(duì)值。

方法九：含氮量測(cè)定：

大部分細(xì)菌的含氮量為干重的12.5，酵母為7.5，霉菌為6.0。依據(jù)含氮量×6.25可確定粗蛋白含量。測(cè)定含氮量的方法很多，如用硫酸/過氯酸/碘酸/磷酸等消化法和杜馬斯氮?dú)夥ā?杜馬斯法測(cè) N? 氣體法是將樣品與 CuO 混合，在二氧化碳?xì)饬髦屑訜岙a(chǎn)生氮?dú)?，收集在呼吸?jì)中，用 KOH 吸收 CO2N? 的量進(jìn)行測(cè)量。

方法十：碳含量測(cè)定：

將部分干重0.2~2.0毫克的生物材料混入1毫升水或無機(jī)緩沖液，用2毫升重鉻酸鉀的2%溶液100℃溫度沸水加熱三十分鐘后冷卻。用水稀釋至5ml，在580納米波長(zhǎng)讀取生長(zhǎng)量可以通過吸光度值計(jì)算。需要試劑做空白對(duì)照，標(biāo)準(zhǔn)樣品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

方法十一：測(cè)定氨基氮：

將發(fā)酵液離心，取上清液，加甲基紅和鹽酸為指示劑，加0.02N 氫氧化鈉顯色至顏色剛好褪去，加入基材18%的中性甲醛，反應(yīng)一段時(shí)間，加入0.02N變色，氨基氮含量根據(jù)氫氧化鈉用量換算。根據(jù)培養(yǎng)液中氨基氮的含量，可以間接反映微生物的生長(zhǎng)狀況。

方法十二：測(cè)定還原糖：

還原糖通常是指單糖、寡糖，能直接被微生物使用。還原糖的測(cè)定可以間接反映微生物的生長(zhǎng)狀況。經(jīng)常應(yīng)用大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)中'海微生物生長(zhǎng)的常規(guī)監(jiān)測(cè)。測(cè)定還原糖方法是將發(fā)酵液離心。取上清液加斐林試劑，沸水煮三分鐘，然后取出加少許鹽酸酸化，接近終點(diǎn)時(shí)加入硫代硫酸鈉，加入淀粉溶液，繼續(xù)加硫代硫酸鈉到終點(diǎn)，查表讀取還原糖含量。

方法十三：測(cè)定其他生理物質(zhì)：

P/DNA/RNA/ATP/NAM乙酰胞壁酸等指標(biāo)，中 海以標(biāo)記葡萄糖為底物的產(chǎn)酸/產(chǎn)氣/CO2產(chǎn)量/耗氧量/粘度/產(chǎn)熱等指標(biāo)可用于生長(zhǎng)的測(cè)定.也可以根據(jù)反應(yīng)前后底物濃度的變化、最終產(chǎn)氣量和微生物活性的變化來反映微生物的生長(zhǎng)情況。

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