非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒(間接法)使用操作說明書
日期:2022-07-26 | 中海生物技術(shù)文庫 | 瀏覽:2478 次
【名稱】
非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒(間接法)使用操作說明書
【作用與用途】
用于檢測(cè)豬血清中的非洲豬瘟(ASF)病毒抗體,評(píng)估養(yǎng)豬場(chǎng)ASF病毒疫苗免疫狀況及感染豬的血清學(xué)輔助診斷。
【檢測(cè)原理】
非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒采用間接ELISA法,在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被基因重組的ASF病毒抗原。在實(shí)驗(yàn)中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有ASF病毒特異性抗體,則與酶標(biāo)板上的抗原結(jié)合;經(jīng)洗滌后除去未結(jié)合的抗體和其他成分后,再加入酶結(jié)合物,與酶標(biāo)板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物;在微孔板中加入底物液,經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物,加入終止液終止反應(yīng)后,用酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度OD值。
【主要成分與含量】
【需自備的材料】 去離子水、微量移液器、酶標(biāo)儀(450 nm)、計(jì)時(shí)器、37 ℃ 溫箱、離心機(jī)(4000 rpm)等。
【用法與判定】
1、用法
1.1 試劑配制
洗滌工作液:使用前,濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫(20~25℃),并搖動(dòng),使沉淀溶解(最好在37℃恒溫培養(yǎng)箱中加熱5~10 min),然后用蒸餾水作10倍稀釋(例如:75 mL的濃縮洗滌液加上675 mL蒸餾水)混勻,稀釋好的洗滌液2~8℃可存放7日。
1.2 樣本處理
① 取動(dòng)物全血,待血液凝固后,4000 rpm離心10 min,收集上清。也可以自然凝固析出血清,無溶血。
② 在血清稀釋板中按1:50稀釋待檢血清樣品(245 µL樣本稀釋液中加5 µL待檢血清樣品),充分混勻。
注:陰、陽性對(duì)照不用稀釋。
1.3 操作步驟
① 取酶標(biāo)板(根據(jù)樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取100 µL加至酶標(biāo)板中。同時(shí)設(shè)陰、陽性對(duì)照各2孔,取陰性、陽性對(duì)照各100 µL分別加入反應(yīng)孔中。輕輕振勻孔中樣品,蓋上蓋板膜,37℃溫箱中避光反應(yīng)30 min。
② 棄去孔中的溶液,每孔加入稀釋好的洗滌液300 µL,靜置1 min后,棄去洗滌液。洗滌4次后在吸水紙上拍干。
③ 配制酶結(jié)合物工作液:按體積比1:100(1份酶結(jié)合物濃縮液+99份酶結(jié)合物稀釋液)混勻備用。
④ 每孔加酶結(jié)合物工作液100 µL,蓋上蓋板膜,37℃溫箱中避光反應(yīng)30 min。
⑤ 棄去孔中的溶液,洗滌4次,方法同②。
⑥ 將底物A液與底物B液按1:1混合,加入孔中,100 µL/孔,蓋上蓋板膜,37℃溫箱中避光反應(yīng)15 min。
⑦ 每孔加入終止液50 µL,5 min內(nèi)測(cè)定結(jié)果。
2、判定
在酶標(biāo)儀上讀各孔OD450nm值。
① 試驗(yàn)成立的條件:
陰性對(duì)照平均OD450nm值<0.20且陽性對(duì)照平均OD450nm值≥1.0,試驗(yàn)結(jié)果才有效;否則,應(yīng)進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。
② 計(jì)算方法:
③ 陰陽性判斷:
S/P<0.2時(shí),判為陰性;S/P≥0.2時(shí),判為陽性。
【注意事項(xiàng)】
1、試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫。使用后放回2~8℃保存。
2、不同批號(hào)的試劑盒組份不得混用,不同試劑使用時(shí)應(yīng)防止交叉污染。
3、底物液和終止液不能暴露于強(qiáng)光或接觸氧化劑。
4、待檢血清數(shù)量較多時(shí),應(yīng)先稀釋完所有待檢血清,再加到抗原包被板上,使反應(yīng)時(shí)間一致。
5、稀釋10×濃縮洗滌液時(shí),如發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶,應(yīng)加熱使其溶解后再使用。
6、移液時(shí),應(yīng)盡量準(zhǔn)確,防止產(chǎn)生氣泡。
7、應(yīng)嚴(yán)格遵守各操作步驟規(guī)定的時(shí)間和溫度。
【貯藏與有效期】2~8℃避光保存,有效期為12個(gè)月。
【規(guī)格】96孔/盒;192孔/盒
【生產(chǎn)企業(yè)】
北京中海生物科技有限公司
中海生物技術(shù)(棗莊)有限公司
網(wǎng)址:hndhjn.com
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